快速动力学

g蛋白偶联七跨膜(7-TM)受体(GPCRs)代表了在真菌、植物和动物中发现的大型、多样化的基因家族。GPCR受体家族主要通过与细胞内g蛋白相互作用来内化细胞外环境信号。GPCR配体和调节剂的范围从肽和非肽分子到趋化因子、核苷、生长因子和光。GPCRs作为一种重要的药理学蛋白家族，在许多关键的细胞信号传导反应中的参与引起了相当大的兴趣。此外，这个7-TM家族的配体结合位点在细胞膜外表达，允许相对容易地获得小分子药物，使该基因家族具有高度的药物性。配体或激动剂结合到GPCR激活相关的三聚体gtp结合蛋白(G蛋白)。G蛋白由α-亚基和β-和γ-亚基复合体组成(图1)，α-亚基与鸟嘌呤核苷酸结合，激活时将GTP水解为GDP。

每个G蛋白亚基的不同亚型可以通过激活细胞信号通路来实现不同的功能输出。比如G的激活_作为-偶联受体激活效应腺苷酸环化酶(AC)将胞浆ATP转化为环AMP (cAMP)。相反，激活gai偶联受体使AC失活_aq该亚家族触发效应磷脂酶C (PLC)将膜结合的磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)裂解为肌醇(1,4,5)三磷酸(IP)_3.)和二酰基甘油(DAG)。知识产权_3.知识产权行为_3.在内质网膜中发现的受体可以诱导Ca^{2 +}释放。这些小分子都参与了GPCR的激活，cAMP, PIP₂、IP_3.， DAG和Ca^{2 +}被称为第二信使，可被研究人员用作研究GPCR功能的靶标，并为发现可调节GPCR活性的小分子提供分析。

定量钙的常用试剂^{2 +}释放的染料是质膜的渗透性Fluo-4我．在与活细胞孵育后，内源性细胞酯酶裂解乙酰氧基甲酯官能团，产生染料Fluo-4，在Ca存在时具有高荧光性^{2 +}．生物传感器第二信使蛋白也可以在市场上买到，它可以使用病毒转染试剂BacMam 2.0瞬时转染到细胞中。然而，所有这些分析的结果是，需要快速动力学分析的第二信使的快速发作和短寿命。

为了准确量化第二信使，分析读出系统必须利用机载注射器，以大约1秒的时间分辨率向细胞快速添加激动剂和即时动力学检测。虽然基于pmt的微孔板阅读器可以测量基于细胞群的结果，但基于成像的读数允许细胞亚群分析，其中只计算积极响应的细胞。这往往提供了显著增加的分析窗口，在3-4倍的顺序。

钙动力学

cAMP依赖于g -和gi调控的动力学特征