快速细胞信号

g蛋白偶联的七跨膜(7-TM)受体(GPCRs)代表了在真菌、植物和动物中发现的大型、多样化的基因家族。GPCR受体家族主要通过与细胞内g蛋白相互作用来内化细胞外环境信号。GPCR配体和调节剂的范围从肽和非肽分子到趋化因子、核苷、生长因子和光。GPCRs作为一种重要的药理学蛋白家族,在许多关键的细胞信号传导反应中的参与引起了相当大的兴趣。此外,这个7-TM家族的配体结合位点在细胞膜外表达,因此相对容易获得小分子药物。这种可获取性使得基因家族具有高度的药物性。配体或激动剂结合到GPCR激活相关的三聚体gtp结合蛋白(G蛋白)。G蛋白由α-亚基和β-和γ-亚基复合体组成(图1),α-亚基与鸟嘌呤核苷酸结合,激活时将GTP水解为GDP。

g蛋白偶联受体(GPCR)信号通路示意图。
图1。g蛋白偶联受体(GPCR)信号通路示意图。

每个G蛋白亚基的不同亚型可以通过激活细胞信号通路来实现不同的功能输出。比如G的激活作为-偶联受体激活效应腺苷酸环化酶(AC)将胞浆ATP转化为环AMP (cAMP)。相反,激活gai偶联受体使AC失活aq该亚家族触发效应磷脂酶C (PLC)将膜结合的磷脂酰肌醇4,5-二磷酸(PIP2)裂解为肌醇(1,4,5)三磷酸(IP)3.)和二酰基甘油(DAG)。知识产权3.知识产权行为3.在内质网膜中发现的受体可以诱导Ca2 +释放。这些小分子都参与了GPCR的激活,cAMP, PIP2、IP3., DAG和Ca2 +被称为第二信使,可被研究人员用作研究GPCR功能的靶标,并为发现可调节GPCR活性的小分子提供分析。

定量钙的常用试剂2 +释放的染料是质膜的渗透性Fluo-4我.在与活细胞孵育后,内源性细胞酯酶裂解乙酰氧基甲酯官能团,产生染料Fluo-4,在Ca存在时具有高荧光性2 +生物传感器第二信使蛋白也可以在市场上买到,它可以使用病毒转染试剂BacMam 2.0瞬时转染到细胞中。然而,所有这些分析的结果是,需要快速动力学分析的第二信使的快速发作和短寿命。

为了准确地量化第二信使,分析读出系统必须利用机载注射器。这些注射剂提供快速添加激动剂到细胞和即时动力学检测,时间分辨率约为1秒。虽然基于pmt的微孔板阅读器可以测量基于细胞群的结果,但基于成像的读数允许细胞亚群分析,其中只计算积极响应的细胞。这往往提供了显著增加的分析窗口,在3到4倍的顺序。

狮心FX与注射器
2022世界杯附加赛决赛安捷伦BioTek Lionheart FX自动显微镜具有偏移式注射针尖,可实现快速注射/成像操作,实现快速动力学反应。

GPCR信号通路
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应用笔记:

视觉抽象:

BioTek的可视化摘要是简短的动画演示,描述了特定应用的增强显微镜工作流程。

钙动力学
钙动力学

动力学特性
cAMP依赖于g -和gi调控的动力学特征

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仅供研究使用。不用于诊断程序。

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