客户关注的焦点
用协同阅读器检测生命的节奏
约翰·Hogenesch博士
23-January-19
大多数生物体都有昼夜节律钟，在各种各样的活动和行为中调节24小时的节律。在人类中，生物钟调节睡眠时间，影响你需要多少睡眠。毫不奇怪，这些生物钟因素的改变会影响睡眠，也会影响各种各样的疾病，如代谢综合征、心血管疾病，甚至癌症。约翰·Hogenesch博士俄亥俄州杰出学者;人类遗传学、免疫生物学和围产期研究所儿科教授;俄亥俄州辛辛那提市辛辛那提儿童医院医疗中心时间生物学中心副主任，是世界上最著名的哺乳动物昼夜节律分子机制专家之一。他的研究重点是了解生物钟的工作原理，并利用它们来改善人类健康。
Hogenesch实验室使用了几种人类和小鼠的生物钟功能细胞模型，其中时钟因子的启动子，如BMAL1或PER2，与荧光素酶报告基因融合。使用这些报告细胞，可以在数天甚至数周内每30分钟测量一次发光;追踪他们自己自主的昼夜节律。这些节律可以自己测量，也可以用小分子、sirna、cdna或其他遗传扰动处理后测量。十多年来，Hogenesch实验室依靠BioTek的Synergy™2多模式阅读器进行发光测量。事实上，几年前，在为时间生物学中基于发光的中通量筛选奠定基础时，Hogenesch博士和他的同事，佛罗里达大学的Andrew Liu博士使用Synergy 2开发了报告细胞系。这一信息被收录在2014年的PLOS遗传学论文中，题为“由新的脂肪细胞和肝细胞昼夜时钟模型揭示的周期基因的细胞类型特异性功能”(doi: 10.1371 / journal.pgen.1004244）.
最近，当Hogenesch博士决定购买一个额外的读取器以跟上发光分析吞吐量的需求时，他再次转向BioTek;这次是协同Neo2混合多模读者。Hogenesch博士指出:“Synergy Neo2具有我们对样品所要求的灵敏度和较短的读取时间。”此外，在发光测量过程中保持恒定的温度非常关键，这两个Synergy阅读器都做得很好。96孔格式的测量是有价值的，因为它可以实现中等通量的遗传和小分子筛选。”他补充说。除了性能之外，他指出Synergy阅读器的持续可靠性尤其受到赞赏，因为它消除了计划外服务成本和停机时间的风险。“我不想和服务技术人员直呼其名，如果你明白我的意思的话，”霍根内什博士说。
BioTek的Synergy阅读器在专业的时间生物学社区中享有健壮和可靠的声誉，Hogenesch博士引用了几位在宾夕法尼亚大学佩雷尔曼医学院、圣裘德儿童研究医院、佛罗里达大学和莫尔豪斯医学院等机构使用该阅读器的同事。
图1。哺乳动物昼夜荧光素酶报告线。U2OS PER2:dLuc#41 (Hogenesch实验室)在只包含E-box共识序列的最小PER2报告子的控制下稳定表达荧光素酶基因。细胞在发光记录介质中运行前与地塞米松同步。在6天的时间里，从96井板中的Synergy Neo2底部光学系统以约1小时的分辨率读取井的数据。平均发光(RLU) +/-绘制的标准偏差(n=12)。
图2。使用Synergy Neo2的96孔板筛的表型例子．短周期昼夜节律表型(-3.2小时，n=3/次)。
以了解更多关于辛辛那提儿童医院医疗中心的信息网站．
感谢John Hogenesch博士分享他的BioTek经验。