使用Millipore的真空歧管和蒙太奇SEQ₉₆Precision™微孔板移液系统套件

作者: Paul Held博士，BioTek Instruments, Inc.应用部门高级科学家

序列反应清理的半自动化

为了产生高质量的DNA序列数据，在进行毛细管电泳和平板凝胶电泳之前，必须从测序产品中去除未合并的染料终止物和盐。乐鱼平台入口Montage™SEQ的统一脱盐和回收能力₉₆测序反应清理试剂盒消除毛细管到毛细管的可变性，有时观察到的测序反应制备乙醇沉淀。

在这里我们描述的使用精密™微孔板移液系统半自动步骤，以执行在Millipore的蒙太奇SEQ概述的程序₉₆序列反应清理试剂盒。该过程使用精密微孔板移液系统甲板上的Millipore真空歧管，用户根据需要打开和关闭系统真空。

图1。精密™微孔板移液系统与填充甲板。Precision™微板移液系统有两盒移液头，位于位置A和d。蒙太奇™SEQ96板和真空歧管位于位置C，使用一个支架(P/N 7112110)，设计用于容纳前面的管连接器。一个单独的支架(P/N 6002076)用于固定96孔无衬底PCR板，然后使用与真空歧管相同的支架放置在甲板B位置。注射溶液位于E位置的试剂库中，注射板位于F位置。

图2。精密微孔板移液系统的甲板布局。如图1所示，在Precision Power™Software (BioTek Instruments)中定义了甲板上必要硬件的位置。然后在软件中提供图形表示。

过程

1. 将30µl注射液(位置E)转移到测序反应样品板(位置B)。
2. 转移30 μ l稀释样品(位置B)到SEQ₉₆板(位置C)。注意SEQ₉₆板位于Millipore真空管汇(Millipore P/N SAVM38401)的顶部。此外，真空歧管通过歧管支架(P/N 7112110)安装在甲板上。
3. 手动打开真空泵，打开阀到歧管。手动调整调节器到一致的压力。注意我们用的是23 - 25英寸。Hg.真空敷2 - 3分钟
4. 将30 μ l注射溶液(位置E)转移到SEQ中₉₆板(位置C)。
5. 真空3 - 4分钟。
6. 在所有井都排空后，关闭真空并打开调节阀以释放任何剩余真空。调节器应读取0 in。Hg。
7. 转移25 μ l注射溶液(位置E)到SEQ₉₆板(位置C)。
8. 每个样品混合20次。
9. 将25µl转移到注射板(位置F)。

图3。Precision™微板移液系统使用的编程步骤。

讨论

蒙太奇™SEQ₉₆试剂盒可以使用BioTek的任何精密微皿移液系统半自动。移液系统可用于分配试剂和转移产品从蒙太奇SEQ乐鱼平台入口₉₆板分别，但真空的控制是手动执行。在本例中，真空设备被放置在Precision的甲板上(图1和图4)，还可以配置在其他位置的真空歧管上运行分析。用户当然需要手动将印版转移到真空中。除了歧管外，Millipore的真空板设备还配有一个四个位置的连接器，连接真空泵、压力表、手动真空调节器和真空歧管(图5)。所有这些部件都使用自密封快速连接器连接，便于安装和拆卸。为了在甲板上使用歧管系统，为了允许甲板自由移动，歧管和4向连接器之间的油管被加长。

图4。真空歧管和持有人蒙太奇SEQ₉₆盘子里。真空歧管安装在甲板上，使用一个多用途支架(P/N 7112110)，该支架被设计用于固定真空歧管。蒙太奇SEQ96板位于真空歧管上。

图5。Millipore真空设备的管道连接。压力调节器，真空表，截止阀和泵连接使用0.25“内径管和快速连接配件。

有许多不同的配置，可以用于这些类型的板。然而，有必要将管汇安装在甲板的一个前端位置，以便油管向前悬垂。位置C被认为是最可接受的，因为与油管的干扰相当少。在本例中，我们使用无裙边96孔PCR板对反应样本进行测序。这就需要使用BioTek的PCR板支架来提供保持平板平整所需的刚性。许多96孔PCR板可以作为常规微板使用。这些类型的PCR板通常可以与标准的精密家具一起使用，因为它们不需要特殊的支架来保持它们平整。

使用Precision Powerä Software对分析过程进行编程非常容易(图2和3)。首先定义试剂和容器在甲板上的位置(图2)，然后创建获得提示、转移和混合流体的编程步骤(图3)。使用Precision Powers灵活的循环函数可以轻松完成板到板转移中的重复步骤的编程。