石油的目标

简介

狮心FX自动成像仪与高数值孔径油浸物镜兼容。这些物镜提供高达100倍的放大倍数，并显著提高了系统的光学分辨率。小到几百纳米的细胞细节，可以在Lionheart FX上使用油浸显微镜来分辨。在这里，我们将介绍如何在Lionheart FX上使用油浸物镜，以及生产高质量荧光图像的最佳实践。

硬件

有两个奥林巴斯油浸物镜可与狮心FX自动细胞成像仪一起使用，可以提供60倍或100倍的放大(图1)。顾名思义，这些高度专业化的物镜必须与油一起使用。一小滴浸油沉积在物镜的前镜头和“连接”它们的盖套之间。透明油具有高粘度，在两个表面之间产生不间断的液体柱。此外，这种油在光学上类似于玻璃，折射率为1.515。这增加了可以进入物镜前透镜的锥光的最大角度，这是物镜的数值孔径(NA)所描述的特征。物镜的NA越大，它能收集的光就越多。此外，具有大NA值的物镜可以解析样本中的更详细信息。与“干式”物镜相比，油浸物镜具有更大的NA值。

图1所示。油浸物镜可与狮心FX使用。

这些目标的详细规范可以在表1中找到。当使用油浸时，要记住一个重要的规格是物镜的工作距离-物镜的前镜头和覆盖物表面之间的距离。Lionheart FX中使用的油浸物镜工作距离极短(<200微米)。因此，必须非常小心，以防止损坏前镜头与盖的碰撞。

重要的是，油浸物镜的工作距离短，这使得它们与厚塑料底部微板(或实验室用具)不兼容，必须与0.17毫米厚的盖卡一起使用。细胞培养容器的底部厚度一般在0.5 mm到2.0 mm之间。由于油浸物镜工作距离较短，在这种工作距离较短的物镜下，无法通过厚底容器成像细胞，因为在样品对焦前，物镜的前透镜会与培养容器发生碰撞。尽管60倍和100倍油物镜的前端都是弹簧加载的，以最大限度地减少因无意碰撞造成的昂贵损失，但它们绝不应与不兼容的培养容器一起使用。

表1。油浸目标可为狮心Fx。

步骤:使用狮心特效油浸物镜

安装油浸物镜的说明可以在狮心FX操作员的手册中找到。注意，油浸物镜在设置过程中不进行校准，仅与手动模式成像兼容。

1)确定你的船的底部高度。

在进入手动模式之前，重要的是要确定载玻片、玻璃底板或任何其他您打算成像的容器的底部标高。定义容器底部标高的说明可以在Gen5帮助菜单或细胞成像训练指南的第39页中找到。你将需要使用一个空气(“干燥”)物镜来完成这个过程。

2)用低功率空中目标找到感兴趣的区域和/或物体。

通常在显微镜中，最有效的方法是在切换到高倍物镜之前，从较低的放大倍率开始寻找感兴趣的物体。使用低功率的空中物镜(如20X)将更容易找到感兴趣的区域，因为它的大视场。在Gen5中使用操纵杆或导航按钮将感兴趣的对象居中，然后继续前进。

3)在切换到油浸物镜前，将物镜降低500微米。

在仪器设置期间，Lionheart FX中使用的油浸物镜没有进行校准。与安装在仪器中的非油物镜不同，从低功率物镜切换到浸油物镜后，焦距可能无法保持。建议您在切换目标之前降低z高度，以减少碰撞风险。

4)换到油浸物镜，按照加油程序进行。

选择你想要使用的油浸物镜，然后点击油罐图标()，打开“Objective Oil Procedure”向导。按照屏幕上的说明，完成所有步骤后单击关闭。

重要提示:不要在物镜的前镜头上添加过多的油。一滴应该足以覆盖整个镜片。添加太多可能会导致油沿物镜一侧流下，损坏仪器中的敏感部件。

5)慢慢提高物镜，直到你感兴趣的物体清晰地聚焦。

一旦目标油程序向导关闭，Gen5将恢复手动模式会话。使用操纵杆或手动模式窗口中的焦点箭头慢慢增加焦点位置。

6)将感兴趣的物镜居中，调整曝光设置。

使用方向箭头将感兴趣的对象置于视野的中心。点击自动曝光按钮调整曝光。您还可以使用“手动模式”窗口中的滑块手动定义曝光设置。

7)在离开第5代或改变目标之前清理目标。

在完成目标油程序的步骤后，Gen5认为目标油是“脏的”。在退出第5代或改变目标之前，会提示你清理目标。正确地清除物镜前透镜上的残余油对于防止仪器或物镜本身的昂贵损坏是至关重要的。

要清理物镜，请按照“物镜清理”窗口中的说明进行操作，完成后单击关闭。

警告:只能用镜头纸清洗物镜。使用其他清洁产品，如多功能实验室湿巾或纸巾乐鱼平台入口，会划伤物镜的镜头，造成不可挽回的损害。千万不要用干燥的镜头纸“打磨”或用力推镜头前。相反，如果需要，轻轻擦去油，使用多张镜头纸。

最佳实践和提示

下面是油浸物镜成像的最佳实践和技巧。遵循这些建议将允许您充分利用这些高倍率物镜，并确保捕获高质量的图像。

1)通过#1.5 (0.17 mm厚)封面卡片对样品进行成像。

如上所述，用于Lionheart FX的油浸物镜只能通过0.17毫米厚的玻璃成像样本。使用正确厚度的封面对于获得高质量的图像和防止损坏你的目标是至关重要的。注意:由于狮心FX是倒置显微镜设计，显微镜载玻片必须装载盖滑块朝下。

2)只使用与您的目标提供的奥林巴斯®浸油f型。

物镜制造商根据物镜的光学特性设计浸没油。由于油的折射率有微小变化，使用其他制造商的浸入式油会对图像质量产生显著影响。重要的是，如果你打算使用之前在另一台显微镜上成像的载玻片，请确保盖玻片已经彻底清洁。即使是其他厂商生产的少量残余油在与合适的油混合后也会降低图像质量。

3)降低LED强度，减少光漂白的影响。

请记住，使用高倍率油浸物镜会比低NA物镜更快地漂白你的样品。具有高NA的物镜从样品中收集更多的光，因此对暗淡信号更敏感。然而，这也意味着你的样品暴露在更多的光，因为物镜在荧光显微镜中作为照明源。当使用这些物镜时，在聚焦或寻找感兴趣的物镜时降低LED强度，不使用时关闭LED是一个很好的做法。

4)专注时要有耐心。

快速提升物镜会导致物镜前镜头和封面之间的破坏性碰撞。慢慢地使你的标本聚焦使用精细聚焦箭头，或者，如果有的话，通过轻轻扭转操纵杆。

5)始终将幻灯片固定在支架上。

使用载玻片支架上的夹子将样品载玻片固定到位。当物镜靠近样品时，如果固定不当，浸泡油的高表面张力会将载玻片从支架中推出。

6)根据需要用纯乙醇清洁你的物镜。

如有需要，可使用纯乙醇清洗物镜上多余的油脂。如上所述，在清洗油浸物镜时，只使用无研磨性的镜片纸，以防止划伤。