2022卡塔尔世界杯完整赛程资源-应用程序公告

基于吸光度的ELISA法检测HTLV-1和-2抗体

下载

相关产品:乐鱼平台入口协同LX

2018年5月31日

简介

人类嗜t淋巴病毒(HTLV)是一个逆转录病毒家族，已知会导致成人t细胞白血病/淋巴瘤和一种称为HTLV-1相关脊髓病的脱髓鞘疾病。1htlv是一种慢病毒，可以感染多种不同类型的细胞，并作为其生长周期的一部分整合到细胞基因组中。2HTLV检测通常在输血、组织移植和临床诊断中进行，并基于检测血清中存在的HTLV-1和-2抗体。3.这些测试通常使用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行。最初的ELISA结果无反应的标本被认为是htlv阴性;酶联免疫吸附试验(ELISA)阳性的标本重复检测，并经Western blot验证。

ELISA是生物医学研究中最常用的检测方法之一。许多临床、兽医和研究分析使用抗体的特异性来识别来自任意数量不同基质的各种分析物。尽管分析物的多样性，ELISA的一般过程是恒定的。在一个典型的酶联免疫吸附试验中，在数据收集之前，进行几次重复的微孔板清洗、试剂添加和孵育，以诱导化学反应并去除未结合的物质。在许多情况下，ELISA反应得到的数据是颜色吸光度。本应用简介描述了使用低成本的安捷伦BioTek Synergy LX多模式阅读器进行人类HTLV-1和-2 ELI2022世界杯附加赛决赛SA检测。

材料与方法

多板HTLV-1和-2微elisa试剂盒(部件号500576)来自Avioq (Durham, NC)。按照检测试剂盒说明书中的描述进行检测。简单地说，对照(阴性血清和阳性HTLV-1和HTLV2血清)用样品稀释液1:5稀释，并将100µL移液到预包被的ELISA板孔中。用样品缓冲液进一步稀释HTLV-1和-2对照样品。培养皿在37°C下孵育1小时，之后用300 μ L的洗涤缓冲液清洗四次，洗涤周期之间使用Agilent BioTek浸泡30秒2022世界杯附加赛决赛EL406洗衣机自动售货机。清洗后，在所有孔中加入100 μ L EnzAbody工作液。工作液每日用EnzAbody稀释液稀释EnzAbody浓缩液1:251。EnzAbody共轭添加后，将平板在37°C下孵育1小时，并按照前面所述再次清洗。洗净后，在所有孔中加入100 μ L TMB底物(TMB与过氧化物溶液1:1混合)，在室温下在黑暗中孵育30分钟。加入100 μ L 2NH后，反应停止2所以4．使用Agilent BioTek测定450 nm和630 nm处的吸光度2022世界杯附加赛决赛协同LX多模的读者。使用delta OD值(630 nm参考)进行数据分析。

结果与讨论

临床HTLV-1和-2试剂盒阳性和阴性对照标本的吸光度比较显示出良好的重复性。如图1所示，同时制备HTLV-1或HTLV-2的单独对照，但在不同的检测板上运行，显示出非常好的相关性。所有阴性和阳性对照均通过了检测试剂盒的验证标准(数据未显示)。

对照孔吸光度值板内比较。

图1所示。对照孔吸光度值板内比较。比较了HTLV-1和HTLV-2阳性和阴性血清试剂盒控制的两个单独板的吸光度值。阴性对照的数据代表每个板上8口井的平均值和标准差，而阳性对照(HTLV-1和-2)代表每个板上4口井。

HTLV-1和HTLV-2阳性对照血清样品的连续稀释证明了Synergy LX使用ELISA进行定量测定的能力。在不同的板上进行的测量与稀释程度是线性的，并且可重复(图2)。注意，由检测试剂盒提供的阳性对照可被稀释约30倍，然后返回的吸光度值不再被认为是阳性。

HTLV1和HTLV II阳性血清样品稀释的比较。

图2。HTLV-1和HTLV-2阳性血清样品稀释的比较。阳性对照样品分别在不同的平板上进行稀释，并比较吸光度结果。绿色虚线表示检测阳性样品被切断。数据点代表四个决定的平均值和标准偏差。

结论

这些数据表明Synergy LX能够测量常规ELISA反应的吸光度。稀释已知的阳性样品，表明灵敏度的测定方法以及多模式阅读器。虽然许多ELISA测定结果基于实验样品和对照样品之间的比较而返回定量的阳性/阴性测定，但该技术也可用于定量未知测定。读取器的光学器件产生从0到2光密度(OD)单位的线性吸光度响应。

参考文献

  1. Gonçalves DU, Proietti FA, Ribas JG, Araújo MG, Pinheiro SR, Guedes AC, Carneiro-Proietti AB(2010)。人类t细胞白血病病毒1型相关疾病的流行病学、治疗和预防中国。Microbiol。启23(3):577-89。doi: 10.1128 / CMR.00063-09。PMC 2901658。PMID 20610824。
  2. 王志强，王志强(2006)。"跟随病毒的路径:逆转录病毒利用宿主DNA修复机制"。ACS化学生物学1 (4):217-26 doi:10.1021/cb600131q。PMID 17163676。
  3. Malm, K.， T. Kierstadius和S. Anderson(2010)一种用于大规模使用的HTLV-1和-2抗体的新筛选试验的评估。中华医学病毒学杂志，82(9):1606-1611。doi。10.1002 / jmv21867。
链接