客户关注的焦点
新的，自动化的路径，以询问更复杂的问题和接收增强的答案
Sachin Katyal博士，马尼托巴大学和马尼托巴癌症护理中心
27-September-16
在彗星分析方面，也被称为单细胞凝胶电泳(SCGE)，很少有研究人员比Sachin Katyal博士拥有超过10年的经验。作为圣犹大儿童研究医院的博士后，Katyal博士将这种分析方法用于研究神经损伤，现在在他的双重角色作为马尼托巴大学药理学和治疗学的助理教授和加拿大温尼伯市马尼托巴癌症中心肿瘤和血液学研究所(RIOH)的高级科学家，Katyal博士将彗星实验应用于脑肿瘤和其他癌症的研究。
彗星试验原理包括将暴露的细胞DNA嵌入琼脂糖凝胶中。当电流作用在凝胶上时，任何损坏或碎片化的DNA都会比完整的DNA以更快的速度通过凝胶。一旦进行荧光染色和成像，结果在视觉上与该实验的天体同名，彗星“头”包含完整的DNA，彗星“尾”包含碎片DNA。“这是一种非常简单但强大的技术，但它需要大量的时间和耐心，”Katyal博士指出。“制作彗星幻灯片已经足够密集了，但后续的手工分析，在显微镜下点击和计数单个彗星，则是十倍的详尽，用户偏见可能会成为一个问题。”事实上，一天的彗星实验工作可能导致数周的手工分析。
高通量彗星分析流管已经存在，可以增加每次处理的样本数量，但Katyal博士想知道是否有可能在处理过程中真正实现彗星分析的自动化。带着这样的想法，他参加了由他的同事，马尼托巴大学生物化学和医学遗传学副教授Kirk McManus博士主持的BioTek仪器研讨会。在研讨会上Cytation™5细胞成像多模式阅读器被讨论和演示，促使Katyal博士询问彗星实验是否可以自动化。BioTek应用实验室的专家参与了讨论，基于Katyal博士的标准，包括计算彗星尾矩的标准，他认为这是最可靠和准确的基因毒性损伤测量，新的分析算法在Cytation 5的集成中被创建Gen5™Microplate Reader和Imager Software，以及一个特殊创建的幻灯片适配器，以适应Trevigen®(Gaithersburg, MD)的CometAssay®幻灯片。
现在，Cytation 5可以对96孔彗星分析板中的每一个孔进行成像，每天处理多个板，因为每一个96孔载片可以在大约30分钟内成像。然后，该软件可以自动分析每一颗彗星，确定彗星尾部的DNA %和彗尾力矩，这两个参数通常用于量化DNA损伤。分析时间减少到仅仅一个小时，并且完全消除了用户偏见和疲劳。Katyal博士的实验室也有一个EL406™清洗分配器，方便和自动化切片制备，进一步减少用户错误和处理时间。
BioTek和Katyal博士在另一项被称为伽马H2AX的基因毒性检测上进一步合作。该实验和彗星实验是互补的基因毒性实验，用于研究癌症化疗机制和经典的DNA修复生物学。在γ-H2AX间接的遗传毒性测量中，受损的DNA触发了一种反应机制，使H2AX迅速磷酸化为γ-H2AX。反馈循环在DNA断裂附近的组蛋白上产生多个磷酸化事件，在细胞核中产生成核位点或点状焦点。当与抗体结合时，这些病灶很容易被看到，但手工计数和分析时间也很费力，容易出现用户错误。在自动化γ-H2AX分析中，Cytation 5的Gen5™软件集成了双掩码方法。在每张井的图像中，软件会自动在每个核周围放置一个遮罩。然后，它确定像素化增加的区域，并细化到那些是焦点的区域，以便最终计算每个核的焦点数量。Cytation 5也用于生化分析，并与系里的其他实验室共享。
Katyal博士说:“Cytation 5彻底改变了我们做很多化验的方式。”“每次我把这个展示给DNA修复生物学的同事看，他们都会从座位上摔下来，说，‘太棒了!’”他在最近的会谈中强调了自动化、高通量的检测方法，并指出这有助于他在国际舞台上扩大自己的专业网络，并形成新的合作关系。随着新能力和新分析平台的探索，BioTek和Katyal博士之间的合作关系将继续增长和扩大。他评论说，这次合作最终将帮助他和其他研究人员“提出更复杂的问题，并得到更好的答案”，无论是从DNA修复生物学的研究立场，还是将其应用于检测癌症耐药性和提高药物疗效的临床环境。
他指出:“让这种学术/行业合作成功的不仅仅是技术。”“关键是诀窍和背后的人。”他说，他是第一批将彗星实验应用于神经元DNA损伤研究的研究人员之一，BioTek在微板技术方面的专业知识以及他们的服务和支持。他赞赏BioTek愿意投入资源参观实验室进行初步设置和培训，并继续协助分析优化和其他合作机会。2022卡塔尔世界杯完整赛程他还指出，学生和他的实验室的其他成员现在能够发展一种专业知识，他们可以将其应用到实验室的研究目标中，也可以在他们建立自己的职业生涯时使用。
有关Katyal博士与BioTek合作的申请细节，请访问:
要了解更多关于曼尼托巴大学而且CancerCare马尼托巴省访问他们的网站。
感谢Sachin Katyal博士分享他的BioTek经验。